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EL ANTIBIOGRAMA
REVISTA LAB BLOGGER CLINICO
EL ANTIBIOGRAMA
Es la prueba microbiológica que se realiza para determinar la sensibilidad de una colonia bacteriana a un antibiótico o grupo de antibióticos.
El antibiograma, una vez realizado, da la siguiente información:
- Grado de sensibilidad de la colonia bacteriana a un determinado antibiótico.
- Diferencia de sensibilidad por parte de la colonia a diferentes antibióticos.
Con esta información, se clasifica el efecto del antibiótico sobre esa determinada colonia en: Resistente (R), Intermedio (I) y Sensible (S).
En el ámbito clínico, el estudio sobre la bacteria causante de la infección y sobre el antibiograma es entregado al médico responsable del paciente. Este último es quien se encarga de decidir el tipo de antibiótico adecuado, dependiendo de los resultados del antibiograma y de otros factores procedentes del paciente, como por ejemplo una alergia a la penicilina.
objetivos del antibiograma
El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la responsable de una infección a uno o varios antibióticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un tratamiento antibiótico.
El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolución de las resistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiológico, a escala de un servicio, un centro de atención médica, una región o un país, es como puede adaptarse la antibioterapia empírica.
Tipos de antibiograma
Método base de dilución en caldo
Este método se utilizaba antes y permitía únicamente probar un solo antibiótico frente a un microorganismo aislado, las otras técnicas si lo permiten.
Método de E-test
Es uno de los métodos más recientes que se han presentado en el mercado y resulta de una curiosa combinación de características de los métodos anteriores. Se trata de una técnica cuantitativa en placa que permite obtener una lectura directa de CMI en µg/ml, ya que se emplean tiras plásticas impregnadas en concentraciones crecientes de antibiótico indicadas en una escala graduada sobre la propia tira.
El microorganismo a investigar se inocula en una placa y sobre ella se deposita la tira del antibiótico (o antibióticos) a ensayar. Tras la incubación de 16-24 horas a 35ºC se observan las placas y se valora la zona de inhibición, de forma elíptica, alrededor de cada tira. La CMI se lee directamente observando el punto más bajo de la elipse que presente crecimiento.
Métodos automatizados
La mayoría de estos novedosos métodos utilizan sistemas de microdilución en medio líquido sobre microplacas con pocillos en "U" e interpretan el crecimiento bacteriano en los diferentes pocillos por medio de un autoanalizador (mediciones por turbidez o fluorescencia) o, en el caso de los sistemas más sencillos, por simple lectura óptica del técnico a través de un visor invertido de espejo.
Su manipulación suele ser fácil y rápida, generalmente automatizada o semiautomatizada, lo que los convierte en métodos ideales para grandes volúmenes de trabajo. Una de sus grandes limitaciones es que sólo ofrecen garantía para investigar microorganismos de crecimiento rápido y que no tengan requerimientos especiales.
Este tiene una microplaca para autoanalizador que incluye fase de identificación y fase de antibiograma (panel microScan).
Las tres filas superiores de la microplaca son la zona de "identificación" del microorganismo, las cinco filas inferiores son el apartado "antibiograma".
Los pocillos que en la imagen muestran un color verde intenso tienen crecimiento bacteriano, o sea, el antibiótico en cuestión no impide el desarrollo del microorganismo a estudio. Los pocillos transparentes marcarían los puntos de inhibición de cada antibiótico.
Método de difusión en agar
Con este método se puede realizar fácilmente pruebas de sensibilidad de un microorganismo frente a múltiples antibióticos
Los agentes antimicrobianos difunden en el medio en forma radial alrededor del disco de papel filtro e inhiben el desarrollo del microorganismo en la zona donde su concentración es suficientemente alta.
Las áreas de inhibición grandes indican una actividad antimicrobiana más efectiva.
A pesar de ser una técnica puramente cualitativa, el método de difusión por disco (o método Kirby-Bauer), en función sobre todo de su comodidad, economía y fiabilidad, ha sido, y aun es, uno de los más utilizados en los laboratorios de todo el mundo.
El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas de agar y sobre su superficie se disponen los discos correspondientes a varios antibióticos.
Se incuban las placas durante 16-24 horas a 35ºC y al cabo de este tiempo se estudia el crecimiento en ellas.
Se valora el diámetro de la zona de inhibición que se forma alrededor de cada disco y se compara con las referencias oportunas publicadas por el NCCLS.
Con esta referencia podemos informar si el microorganismo es Sensible, Intermedio o Resistente (S, I, R) a cada uno de los antibióticos ensayados en las placas.
Interpretación de un Antibiograma
Ciertos mecanismos de resistencia se expresan débilmente in vitro, cuando se inscriben en el DNA bacteriano. Su expresión en el organismo, en donde las condiciones en cuanto a medios son diferentes, expondría al riesgo de fracaso terapéutico.
Para evitar esto, el antibiograma debe ser interpretado de manera global a fin de descubrir, a través de la comparación de las respuestas para cada antibiótico, un mecanismo de resistencia incluso débilmente expresado. Así, gracias a la interpretación, una cepa que aparece como falsamente sensible será categorizada como I o R (Ejemplo: Una cepa de Klebsiella pneumoniae productora de BLSE puede aparecer sensible in vitro a las cefalosporìnas de 3" generación. El resultado de Sensible debe ser corregido a Intermedio o Resistente, ya que la utilización de estos antibióticos correría el riesgo de provocar un fracaso terapéutico).
EJEMPLO ESQUEMATICO DE UN ANTIBIOGRAMA
TABLA DE RESULTADOS
EN CONCLUSION
· El método de Bauer Kirby o método de difusión en disco de antibiograma es el método más utilizado para realizar un antibiograma ya que es más sencillo, reproducible y barato.
· Los métodos automáticos de antibiograma son aplicables cuando se trabaja con grandes volúmenes de trabajo pero no son útiles para bacterias con requerimientos nutricionales complejos.
· En antibiogramas de muestras procedentes de niños o mujeres embarazadas no se debe probar el disco de tetraciclinas ya que no es aplicable terapéuticamente.
· El medio de Muller Hinton debe estar en condiciones adecuadas para un antibiograma si el PH del medio es muy acido se presentara una falsa resistencia y si es muy alcalino presentara una falsa sensibilidad.
· En la incubación si el medio es incubado a menos de 37 grados se presenta una falsa resistencia y a más de 37 grados una falsa sensibilidad.
· Si el inoculo esta en exceso se presentara una falsa resistencia y si el inoculo en insuficiente una falsa sensibilidad.
BIBLIOGRAFIA
· Microbiología / Thomas D. Brock, Michael T. Madigan
2a ed. en español, 1993. México; Englewood cliff: Ed. prentice Hall Hispanoamericana.
· Microbiología / Michael J. pelczar, Jr., Roger D. Reid, 2a. ed- en español., 1982. México: Ed. McGraw-Hill.
· Tratado de microbiología : con inclusión de inmunología y Genética motecular / Bernard D. Davis, 2a. ed., 1978. Barcelona: Ed. Salvat.
· http://www.danival.org/6%20microbio/5000micro_dvf/micro_dvf_43.html
EL ANTIBIOGRAMA
